ОПРЕДЕЛЕНИЕ МЕТАЦЕРКАРИЕВ В РЫБАХ
Для исследования отбирают из водоема по 10 — 15 экз. живых или свежих рыб каждого вида. Регистрируют дату, вид рыбы, название водоема. Проводят наружный осмотр чешуи, кожи, плавников, жабр. С этих участков делают соскобы и компрессорным методом просматривают их под микроскопом. Ножницами разрезают брюшко от анального отверстия до области сердца. С помощью лупы рассматривают сердце, гонады, печень, селезенку, почки, кишечник, серозные покровы, плавательный пузырь. Каждый орган отдельно помещают в чашку Петри или на часовое стекло. С каждого органа берут ножницами небольшие кусочки (3 — 5 мм), помещают на предметные стекла, просматривают под микроскопом на наличие личинок трематод и устанавливают вид метацеркариев.
Исследуют мускулатуру рыб, для чего скальпелем разрезают кожу, начиная от головы, и берут кусочки с поверхностных участков мышц и соскобы с кожи (личинки обычно локализуются в мышечной ткани на глубине 2,5 — 3 мм). Кусочки мышц помещают на предметные стекла или компрессорий и просматривают под микроскопом.
В мускулатуре рыб паразитируют метацеркарии трематод патогенные и непатогенные для человека и животных. Патогенные для человека и животных метацеркарии (описторхисы, меторхисы, клонорхисы, псевдамфистомы) находятся в цистах, характерно наличие у них двух присосок и черного экскреторного пузыря овальной или грушевидной формы, занимающего 1/3 или 1/4 тела личинки. В цистах личинки активно подвижны. Непатогенные метацеркарии — личинки из рода буцефал и рипидокотил. У них имеется одна крупная присоска с пальцеобразными выступами, экскреторный пузырь зигзагообразной формы занимает до 2/3 тела, они слабоподвижны в цистах. Для метацеркариев параценогонимусов характерна более черная экскреторная система с тремя белыми щелевидными просветами.
Для определения жизнеспособности личинок трематод извлекают из органов и тканей рыб, помещают в подогретый до 40°С физиологический раствор, в искусственный желудочный сок (100 мл 0,5%-ного раствора NaCl, 0,5 г пепсина, 0,75 мл 35%-ного раствора соляной кислоты), под лупой осторожно раздражают личинку препаровальной иглой. Наличие даже слабых движений указывает на то, что они живые. Личинок, извлеченных из органов и тканей рыб, освобождают от излишков ткани, кладут на стекло и окрашивают. На препарат наносят 2 капли 3%-ного раствора розоловой кислоты на 70%-ном спирте на 2 мин, добавляют каплю 0,1%-ного раствора едкого калия и еще оставляют на 2 мин. Излишек краски смывают физраствором, препарат высушивают полоской фильтровальной бумаги, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом. Мышечная ткань и мертвые личинки окрашиваются в розовый цвет, живые личинки не окрашиваются.
Жизнеспособность личинок можно определить под микроскопом с подогревательным столиком при 36 — 37°С . Выделенных личинок переносят на столик, добавляют 2 — 3 капли желчи или 0,5%-ного раствора трипсина. Живые личинки через 5 — 10 мин выходят из цист. Можно также поместить личинку в каплю физраствора и под контролем микроскопа освободить ее от наружной оболочки с помощью препаровальной иглы. Наличие движений у личинки указывает на ее жизнеспособность.
Если трудно установить вид метацеркария, то личинку освобождают от оболочек механическим или химическим путем. Механически оболочку разрывают препаровальными иглами под контролем лупи. Химическим — измельченные кусочки поверхностных мышц рыб (0,3х0,5 см) в количестве 10 — 15 г помещают в искусственный желудочный сок в соотношении 1:10, ставят в термостат при 37 — 40°С на 2 — 3 ч, затем процеживают через марлю. Осадок переносят в чашку Петри, цисты вылавливают пипеткой при проходящем свете под лупой или под микроскопом или. добавив Физраствор круговыми движениями чашки отмывают цисты и они концентрируются в центре чашки. Раствор с края осторожно отсасывают резиновой грушей. Промывают до полного удаления остатков мышечной ткани. Для освобождения от внутренней оболочки цисты помещают в теплый 22 — 24°С раствор трипсина и поваренной соли (на 100 мл 1%-ного раствора NaCl берут 1 г трипсина). Метацеркарии трематод, освобожденные от оболочек, имеют характерные признаки, что служит критерием их видовой принадлежности.
В таблице представлены морфологические признаки личинок трематод, паразитирующих у рыб.
| Диагностические признаки личинок трематод (метацеркариев) рыб опасных для человека и плотоядных животных | |||||||||
| № п/п | Виды метацеркариев | У каких видов рыб паразитируют | Локализация в организме рыб | Pазмеры мм, форма цист | Количество оболочек у цисты, их строение | Форма экскреторного пузыря | Наличие присосок и их форма | Подвижность личинки в цисте | Личинки, освобожденные из цисты: размеры, мм; форма тела |
| 1 | Opisthorchis felineus | Язь, елец, чебак, плотва, лещ, усач, густера, подуст, жерех, уклея, синец, чехонь, красноперка, сазан, линь | Мышечная ткань, подкожная клетчатки | 0.23 — 0.38 х 0,18 — 0,28, овальные, реже круглые | Две, наружная и внутренняя | Почковидная, занимает 1/3 тела личинки | Две круглые, ротовая — 0,088 мм, брюшная — 0,077 | Подвижная | 0,20 — 0,26 х 0,12 — 0,22, веретенообразная |
| 2 | Metorchis albidus | Язь, плотва, красноперка, уклея, гольян, лещ, чехонь, густера | Мышцы, оболочки глаз, жаберные дужки, лучи плавников | 0,21 — 0,38 х 0,14 — 0,24. круглые, овальные | То же | То же | Две круглые, одинакового размера | Движения замедленные | 0,17 — 0,24 х 0,11-0,17, задний конец тела расширен |
| 3 | Pseudamphistomum truncatum | Плотва, лещ, красноперка, густера, елец и другие карповые | Мышечная ткань | 0,32 — 0.46х 0,26 — 0,40, круглые | Две, плотно прилегающие | Овальная, нанимает1/3 тела личинки | Две круглые, одинакового размера (0,08 — 0.01) | То же | 0,30 — 0,44 х 0,24 — 0,38, тело покрыто шипиками |
| 4 | Clonorchis sinensis | Язь, елец, плотва, красноперка, лещ, сазан, густера, уклея, пескарь, гольян, карась, окунь, толстолобик | Мышечная ткань, подкожная клетчатка | 0,150 — 0,1 80 х 0,079 — 0.28, почковидная | Наружная и внутренняя, плотно прилегают друг к другу | Почковидная, занимает 1/3 личинки | Две круглые, брюшная больше ротовой | Подвижная в цисте и освобожденная | 0,319 — 0,375 х 0,12 — 0,17, удлиненно-овальная |
| 5 | Metagonimus yokogawai | Язь, карась, сиг, лещ, толстолобик, сазан, горчак, пескарь, таймень, ленок | В чешуе и плавниках | 0,15 — 0,22, шаровидная пли удлиненно-овальная | Две оболочки | Треугольная с закругленными концами | Две круглые, ротовая вдвое больше брюшной | Слабоподвижная | 0,3 — 0,4 х 0,09 — 0,10 |
| 6 | Nanohietus salmincola | Таймень, ленок, сима, горбуша, кета, хариус, пескарь, елец | Мышцы, почки, жабры, чешуя, мышцы плавников | 0,20 — 0,35 х 0,17 — 0,33, овальная | Две, наружная и внутренняя | Овальная | Две круглые, равные | Подвижная в цисте и освобожденная | 0,35 — 0,65 х 0,17 — 0,36, удлиненно-овальная |
| 7 | Echinochasmus perfoliatus | Щука, линь, сазан, лещ, язь, густера, вобла, красноперка, жерех, белоглазка, карась, судак, ерш | Жаберные лепестки | 0,080 — 0,110 х 0,079 — 0,098, овальные, круглые | Наружная оболочка прозрачная, эластичная | Две экскреторные полости овальные | Ротовая присоска с крючьями, брюшная в задней трети тела | Движения очень слабые | 0,116 — 0,043, ротовая присоска с адоральным диском и с 24 крючьями |
| 8 | Rossicotrema donicum | Окунь, ерш, судак | Плавники, поверхность кожи | 0,24 — 0,26 х 1,20 — 0,23, эллипсоидные | Вокруг наружной оболочки черный пигмент кольцами | Из-за пигмента не просматриваются | Не просматриваются | Движения очень слабые | 0,49 — 0,53 х 0,13 — 0,15, тело овально-продолговатой формы |
| Метацеркарии трематод, непатогенные для теплокровных | |||||||||
| 9 | Paracoegonimus ovatus | Щука, окунь и карповые | В мышечной ткани | ,42 — 0,50 с наружной капсулой до 0,70, сферичные темно-прозрачные | Наружная оболочка в 2 — 4 раза толще внутренней | В виде тройника в кольце со щелевидными пространствами, занимает все тело личинки | Две и орган Брандеса 0,08 — 0,12 0,04 — 0,07 | Мало подвижные | Яйцевидной формы |
| 10 | Bucephalus polymorplius | Судак, реже окунь, щука, карповые рыбы | На жабрах, в плавниках, в мышцах | 0,27 — 0,36 х 0,20 — 0,34 | Тонкие, неравномерно отлетают друг от друга | Зигзагообразная, занимает 2/3 тела личинки | 0,18 — 0,22, имеет пальцевидные мышечные отростки | Движения активные у освобожденных от цист личинок | 0,6 — 2,3x0,35, 7 пальцевых выростов |
| 11 | Rhipidocotyle illense | Карповые рыбы | На жабрах, плавниках, в мышцах, глазах, мозге, подкожной клетчатке | 0,27 — 0,37 прозрачная сферически овальная | Тонкие, неравномерно отлетают друг от друга | Зигзагообразная, занимает 2/3 тела личинки | 0,18 — 0,23 х 0,15 — 0,22, имеет два ушкообразных выроста | Движения замедленные у освобожденных личинок | 0,8 — 1,0 х 0,16 — 0,28, имеет два усико образных выроста |
Для установления видовой принадлежности личинок, особенно из сем. Opisthorchidae, патогенных для человека и животных, нередко прибегают для постановки биопробы. Для этого подопытным животным (котятам, морским свинкам, хомякам) скармливают мясо рыб с метацеркариями трематод или мелкую рыбу. Содержат их в клетках. Вид личинки определяют через 3 — 4 недели путем обнаружения в фекалиях животных яиц трематод или половозрелых гельминтов в печени, желчном пузыре, кишечнике (в зависимости от вида гельминтов) при вскрытии подопытных животных.
